RT—PCR检测技术的原理是什么?

RT—PCR检测技术的原理是什么?

PCR,相信我们都不陌生,是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法,即通过试管中进行的DNA复制反应,使极少量的基因组DNA或RNA样品中特定基因片段在短短几小时内扩增上百万倍。

简单说,就是我们在体外模仿体内DNA复制的过程,混合DNA模板、合适的引物、足够的4种dNTP、耐热DNA聚合酶以及适宜的体系后,在一定温度和时间条件下,进行的DNA扩增。

PCR有很多种,其中RT-PCR,全称反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

实验原理是在试管内,以变性-退火-延伸三个基本反应为一个循环,反复重复这种循环,使DNA得以扩增。其目的是检测核酸的表达,主要是RNA的表达,DNA不需要反转录的过程,直接PCR检测即可。

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回归正题。

一、RT-PCR操作步骤

反转录引物选择:

二、RT-PCR需注意的细节

三、RT-PCR写作例句

第一句

第二句(可与第一句合并)

第三句

第四句

RT-PCR was performed with/ accomplished using/ carried out using …according to the manufacturer’s instructions.

第五句

第六句(可写可不写)

第七句(可写可不写)The cDNA was then diluted to 70 μL in water. qPCR was performed with 2×SensiFAST SYBR No-ROX kit (Bioline), gene-specific primers (250 nM final concentration of forward and reverse), and 2 μL cDNA.

举例

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